طراحی و ساخت سازه اختصاصی کلرو پلاستی گیاه برنج حاوی ژن های بتائین آلدهید دهیدروژناز(badh) و فلاودکسین(fld) جهت ایجاد مقاومت به تنش های غیر زنده

ت تنش­های غیر­زیستی از جمله خشکی و شوری اولین عامل کاهش محصول در دنیا است. در این تحقیق ژن بتائین آلدهید دهیدروژناز (badh) هم به عنوان یک نشانگر غیر­آنتی­بیوتیکی و هم به عنوان یکی از ژن­های کاندید در تحمل به تنش­های غیر­زیستی به همراه ژن فلاودکسین (fld) در ساخت ناقل کلروپلاستی برای گیاه برنج مورد استفاده قرار گرفت. بدین منظور ابتدا دو قسمت از یک ناحیه اختصاصی هدف­گیری کننده به پلاستوم برنج (fr) با افزودن جایگاه آنزیمی مناسب جهت ورود کاست­های ژنی به مرکز آن، در دو مرحله به گونه­ای با استفاده از pcr از ژنوم کلروپلاستی برنج جدا­سازی شد که امکان اتصال مجدد آنها ضمن کلون­سازی ایجاد گردد. سپس طراحی کاست ژنی برای ژن های fld و badh تحت نواحی تنظیمی کلروپلاستی انجام شد، به طوری­که ژن fld  همراه با  rbcl 5'utr و ژن badh همراه با t7gene10 5'utr به صورت پلی­سیسترونی تحت پیشبر قوی کلروپلاستی prrn و پایانبر rbcl 3'utr کلون­سازی شدند. سرانجام کاست کامل دو ژنی fld/badh  به همراه نواحی تنظیمی از ناقل نوترکیب حاصل موسوم به pbf جدا و در مرکز ناحیه هدف گیری کننده به کلروپلاست برنج در دو جهت کلون­سازی گردید. دو ناقل مختص کلروپلاست حاصل موسوم به pfrfb(-) و pfrfb(+) پتانسیل الحاق هدفدار ژن­های مقاومت به شوری و خشکی را با دو جهت­گیری مختلف نسبت به نواحی داخلی ژنوم کلروپلاستی گیاه برنج دارا بوده و قادرند با هدف ایجاد مقاومت بالا به شوری، خشکی و سرما در انتقال ژن به کلروپلاست گیاه برنج با استفاده از تفنگ ژنی مورد استفاده قرار گیرند.